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摘要：采用反相高效液相色法，以乙腈+水+冰乙酸为流动相，使用C18柱为填料的不绣钢柱和二极管阵列检测器，在230nm和275nm波长下对42.4%唑醚·氟酰胺悬浮剂进行分离和定量分析。结果表明吡唑醚菌酯和氟唑菌酰胺的线性相关系数分别为1.000、1.000，变异系数分别为0.80%、1.25%，平均回收率分别为100.11%、99.43%；试验数据符合CIPAC《确认农药制剂分析方法准则》的要求。

关键词：吡唑醚菌酯；氟唑菌酰胺；高效液相；分析

吡唑醚胺和氟唑菌胺都是德国 BASF公司研制的一种具有自主知识产权的新农药。吡唑醚胺： ZL95194436.3；欧洲发明专利 No.EP2649879A1。

巴斯夫（BASF）公司研发的甲氧基丙烯酸类杀菌剂 Pyraclostrobin于1996年首先进行了化学修饰，并于2002年在德国注册。吡唑醚菌酯是一种新型高效低毒农药，其作用机制是通过对其Q0位点进行靶向抑制，进而阻碍其对植物的生长和代谢。本发明是一种集保护、治疗和铲除于一体的药剂，适用于多种作物上的霜霉病、白粉病、疫病和锈病等病害的综合防治。此外，已有研究发现，嘧霉胺对作物的生长发育也有很好的调控效果，可以抑制作物的老化，增强作物的抗逆能力，从而促进作物的增产。

氟唑菌酰胺（Fluopyram）是拜耳公司开发的一种吡啶类杀菌剂，2010年首次被注册。氟唑菌胺与嘧霉胺具有类似的机理。也是通过抑制线粒体呼吸链复合体III的Q0位点来抑制病原菌的呼吸作用，但与吡唑醚菌酯的结合位点不完全相同。氟唑菌酰胺能有效地控制由副囊菌，担子菌，半知菌等真菌所致的各种疾病，其中以灰葡萄孢最为显著。另外，氟唑菌酰胺还能通过植株传递，从而达到控制连作障碍的目的。

由于吡唑醚菌酯和氟唑菌酰胺均为Q0I类杀菌剂，具有相似的作用机制，因此在农业生产中常将两者复配使用或轮换使用，既可提高防治效果，又可延缓病原菌的抗性发展。但需要注意的是，目前已有报道称一些病原菌对吡唑醚菌酯和氟唑菌酰胺产生了抗性，因此在使用时需严格遵循说明书，合理轮换用药，避免抗性的进一步发展。总之，吡唑醚菌酯和氟唑菌酰胺是两种优异的杀菌剂品种，凭借其优异的病害防治效果在农业生产中得到了广泛应用。但在今后的使用中，需重视抗性管理，延缓抗性发展，促进其可持续利用。同时，加强对其环境行为、毒理学特性的研究，确保其在农业生产中的安全合理使用。

1 实验部分

1.1仪器

高效液相色谱仪：Agilent 1260，具二极管阵列检测器、自动进样器和脱气机；

Agilent Chemstation 色谱工作站；

色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18柱，150mm×4.6mm（i.d.），粒径3.5μm；

微孔滤膜：0.45μm；

超声波振荡器。

1.2试剂和溶液

乙腈：色谱纯；

水：新蒸二次蒸馏水；

冰乙酸：分析纯；

吡唑醚菌酯标样：已知质量分数≥97%（德国BASF提供）；

氟唑菌酰胺标样：已知质量分数≥98%（德国BASF提供）；

1.3液相色谱操作条件

流动相：乙腈+水+冰乙酸=65+35+0.1（V/V/V）；

流速：1.0mL/min；

柱温：30℃；

检测波长：0—5 min 230nm，

5—8 min 275nm；

进样体积：5.0μL；

保留时间：氟唑菌酰胺：3.3min，吡唑醚菌酯：6.5min（见图1、图2）。

1.4测定步骤

1.4.1 标准溶液的制备

取0.02g吡唑醚菌酯和氟唑菌酰胺标准品，放入100mL容量瓶。加入乙腈溶解，并超声5min使其溶解。冷却至室温后，用乙腈定容并摇匀，得到标准储备液。

1.4.2 样品溶液的制备

将待测样品0.1g准确称取于100mL容量瓶中，加入少许水润洗，使样品初步溶解。加入80mL乙腈，超声处理5min，使样品完全溶解。待溶液冷却后，用乙腈定容至刻度，充分摇匀。用滤纸过滤该溶液，即得到待测样品溶液。

1.4.3 样品测定

在仪器操作条件下，待基线稳定后，连续进样数针标准溶液，记录响应值，直至连续两针响应值相对偏差小于1.5%，表明仪器稳定。然后按照标准溶液、样品溶液、样品溶液、标准溶液的顺序进样测定，记录响应值。

1.4.4 计算

将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中吡唑醚菌酯、氟唑菌酰胺的峰面积分别进行平均。试样中吡唑醚菌酯、氟唑菌酰胺的质量分数Xi（%），按下式计算：

式中：

A1 ──标样溶液中吡唑醚菌酯、氟唑菌酰胺峰面积的平均值；

A2 ──试样溶液中吡唑醚菌酯、氟唑菌酰胺峰面积的平均值；

m1 ──吡唑醚菌酯、氟唑菌酰胺标样的质量，g；

m2 ──试样的质量，g；

p ──吡唑醚菌酯、氟唑菌酰胺标样的质量分数，%；

2 结果

2.1 流动相的选择

分别使用不同比例的甲醇、乙腈和乙酸水溶液作为流动相，对试样进行分离条件选择，结果表明，用乙腈+水+冰乙酸=65+35+0.1（V/V/V）作为流动相，分离效果好，出峰时间短，峰型对称，满足分析要求。

2.2 检测波长的选择

将1.4.1制备的吡唑醚菌酯和氟唑菌酰胺标样溶液进样分析，用二极管阵列检测器扫描紫外光谱，得到两种成分的紫外吸收图谱（图3、4）。通过对比发现，吡唑醚菌酯和氟唑菌酰胺分别在275nm和230nm有最大吸收，且响应值相当。样品中杂质及表面活性剂与目标成分的分离度均大于1.5。因此选择230nm和275nm双波长切换模式进行定量测定。

2.3 分析方法的线性相关性

配制一系列已知浓度的标准溶液，分别移取不同体积于10ml容量瓶中，用乙腈定容，摇匀。在1.3条件下测定，记录峰面积。以吡唑醚菌酯和氟唑菌酰胺浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。吡唑醚菌酯回归方程为y1=10.5577x+7.8774，相关系数r1=1.000（表1、图5）；氟唑菌酰胺回归方程为y2=10.5962x+13.8963，相关系数r2=1.000（表2、图6）。

2.4 分析方法的精密度试验

称取五份同一样本，在1.3色谱操作条件下进行平行测定，对测定结果计算分析方法的平均偏差、标准偏差和变异系数。测得吡唑醚菌酯的平均偏差为0.12%，标准偏差为0.17，变异系数为0.80%；氟唑菌酰胺的平均偏差为0.24%，标准偏差为0.27，变异系数为1.25%（见表3、表4）。

2.5 分析方法的准确度试验

准确称取5个已知含量的试样，分别准确加入不同体积的标准溶液，在上述色谱操作条件下测定含量，测得吡唑醚菌酯的平均回收率为100.11%，氟唑菌酰胺的平均回收率为99.43%（见表5、表6）。

3 讨论

本研究建立了一种通过高效液相色谱同时测定唑醚·氟酰胺42.4%悬浮剂中吡唑醚菌酯和氟唑菌酰胺含量的方法。该方法简便快速、灵敏度高、重复性好、回收率高，可用于唑醚·氟酰胺悬浮剂产品的质量控制。根据表1、表2所测数据可得，吡唑醚菌酯在54.51μg/mL～436.08μg/mL线性范围内，相关系数r=1.000；氟唑菌酰胺在60.19μg/mL～481.52μg/mL线性范围内，相关系数r=1.000。符合CIPAC分析方法准则线性相关系数r≥0.99的要求。根据表3、表4可得，吡唑醚菌酯和氟唑菌酰胺5次重复测定实验的平均值分别为21.66%和21.49%。依据CIPAC相对标准偏差RSD≤2（1-0.5lgC）×0.67，当C=21.66%时，RSD=1.687，实测吡唑醚菌酯的变异系数RSDr=0.804＜1.687；当C=21.49%时，RSD=1.689，实测氟唑菌酰胺的变异系数RSDr=1.253＜1.689。均可被CIPAC准则要求所接受。

在方法建立过程中，为了得到良好的分离效果和检测灵敏度，本研究对流动相和检测波长等色谱条件进行了优化筛选。实验结果表明，以乙腈+水+冰乙酸=65+35+0.1（V/V/V）为流动相，在230nm和275nm双波长切换模式下检测，能使吡唑醚菌酯和氟唑菌酰胺得到很好的分离，峰型对称性好，基线平稳，无明显干扰。其原因在于吡唑醚菌酯和氟唑菌酰胺在此条件下具有最佳的溶解度、合适的极性以及较强的紫外吸收特性，从而能以最佳的形态被分离和检测出来。在此基础上，本研究进一步考察了方法的线性相关性。结果显示，在一定浓度范围内，以峰面积对吡唑醚菌酯和氟唑菌酰胺的浓度作图，线性关系良好，相关系数均达到0.999以上。说明在选定的色谱条件下，待测物的量与仪器响应信号成正比，检测结果具有很好的定量分析基础。对于一个分析方法来说，除了要具有良好的分离效果和线性关系外，还需要有足够高的精密度和准确度。为此，本研究分别通过精密度和回收率试验，对方法的重现性和准确性进行了评价。精密度试验结果表明，5次平行测定的RSD均小于2.0%，表明方法重现性良好，能够满足日常分析的需要。另一方面，在加标回收试验中，两种成分的平均回收率也都在98%以上，进一步说明该分析方法准确可靠，能够真实反映样品中待测成分的实际含量。

需要指出的是，本方法的适用性可能还需要进一步验证。由于唑醚·氟酰胺悬浮剂产品中除了吡唑醚菌酯和氟唑菌酰胺外，还可能含有其他助剂成分，这些成分在某些情况下可能对分析测定造成干扰。因此，有必要在后续研究中对不同厂家、不同批次的产品样本进行测试，考察方法的普适性和抗干扰能力，为分析结果的准确可靠提供更充分的依据。此外，从环保和节约的角度出发，流动相中的有机溶剂用量可能还有进一步优化的空间。目前的方法虽然能达到良好的分离效果，但乙腈的用量相对较大。通过合理调整流动相的配比，在保证分离效果的同时最小化有机相的使用量，不仅可以降低分析成本，更有利于减少危险化学废物的产生，更加符合绿色环保的分析理念。这也是值得在未来研究中给予关注的问题。

总的来说，本研究建立的高效液相色谱法快速、灵敏、准确，能够满足唑醚·氟酰胺悬浮剂产品质量控制的分析检测需求。研究得到的色谱条件可为类似农药制剂的分析提供参考，具有一定的实用价值。但在实际应用中，还需注意方法的适用范围，根据具体情况进行必要的验证和优化，以期获得更加可靠和环保的检测手段。相信通过深入系统的研究，农药制剂的质量控制和管理水平将得到进一步提高，为农业生产和环境安全提供有力的支撑和保障。

4 结论

实验设计了三个添加水平的样品，分别为标示量的80%、100%和120%，每个水平重复测定三次。测定吡唑醚菌酯和氟唑菌酰胺的回收率，平均回收率分别为100.11%和99.43%。回收率均符合CIPAC要求的98.0%～102.0%范围，表明方法准确度高。

采用本文建立的HPLC外标法测定唑醚·氟酰胺悬浮剂中吡唑醚菌酯和氟唑菌酰胺含量具有多方面优点：（1）色谱条件下，两种成分获得良好分离，形态对称，满足分析要求，专属性良好；（2）峰面积与浓度呈现良好线性关系，相关系数高，线性范围宽，灵敏度高；（3）仪器精密度和方法精密度均较高，变异系数小于CIPAC规定范围，满足分析要求；（4）回收率试验表明方法准确度高，符合CIPAC要求；（5）分析流程简单，操作条件易于控制，样品制备简便快速，提高分析效率；（6）采用HPLC测定，避免了气相色谱法的问题，仪器维护简单，分析成本低。

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作者简介：吕建伟，男，1986年，标准化工程师，主要从事农药分析方法的开发和标准制订相关工作，E-mail：lvzeljw@163. com。