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摘要：本文依据GB/T12763.4-2007（14）>方法要求，通过对海水及海水养殖废水中总磷进行实验室测定，验证在我站实验室条件下开展海水中总磷测定的适用性。

关键词：海水中总磷；实验室测定；验证；适用性

通过实验室现有条件按照《海水 总磷的测定 过硫酸钾氧化法

》GB/T12763.4-2007（14）>的方法进行检测，验证实验室有能力在满足方法要求的情况下开展检测。

1 适用范围

适用于海水中总磷的测定。

2 原理

海水样品在酸性和110℃～120℃条件下，用过硫酸钾氧化，有机磷化合物被转化为无机磷酸盐，无机聚合态磷水解为正磷酸盐。消化过程产生的游离氯，以抗坏血酸还原。消化后水样中的正磷酸盐与钼酸铵形成磷钼黄。在酒石酸氧锑钾存在下，磷钼黄被抗坏血酸还原为磷钼蓝，于882nm波长处进行分光光度测定。

3 仪器设备

①紫外可见分光光度计（752N）②立式压力蒸汽灭菌器（YXQ-50SII）③耐压螺口比色管带盖（50ml）④聚乙烯瓶（1000ml）

4 试剂

①磷酸盐磷标准溶液（102822），500 mg/L）②总磷标准样品（（203987），1.30±0.07mg/L）③过硫酸钾（SIGMA，250g，RT）④钼酸铵（广东光华，500g，AR）⑤酒石酸氧锑钾（麦克林，25g，AR）⑥抗坏血酸（科密欧，25g，GR）

5 样品采集

5.1 采样前，所用聚乙烯瓶用洗涤剂洗净，再用（1+3）盐酸浸泡24小时以上，然后用超纯水冲洗干净。

5.2 样品

采样后冷藏保存24h内完成分析或者冷冻保存60d内分析。

6 验证内容

6.1 标准曲线

分别移取0.00mL、0.10ml、0.20ml、0.50ml、0.80ml、1.00ml和2.00m1磷酸盐标准使用液（浓度为2.50 mg/L）于50ml耐压螺口比色管中，用超纯水定容至25ml标线，各加入2.5ml过硫酸钾溶液，混匀，旋紧瓶盖。把上述比色管置于不锈钢框中，放入立式压力蒸汽灭菌器中加热消煮，待压力升至1.1kpa（温度为120℃）时，控制压力在1.1kpa～1.4kpa（温度120℃～124℃）保持30min。消煮后的样品冷却至室温后，加入0.50ml抗坏血酸溶液，摇匀，加入2.0ml硫酸-钼酸铵-酒石酸氧锑钾混合溶液和0.50ml抗坏血酸溶液，混匀，显色10min后，在分光光度计上，用5cm比色池，以水作参比，于882nm波长处测定（0，0.01，0.02，0.05，0.08，0.10，0.20）mg/L溶液的吸光值，以磷酸盐的浓度（mg/L）为横坐标，其对应的吸光度（扣除空白吸光值后分别为：0，0.035，0.063，0.141，0.227，0.297，0.573）为纵坐标建立标准曲线，曲线方程为：y =2.86x + 0.003，相关系数r = 0.9996。

6.2 检出限和测定下限

根据HJ 168-2020附录A中的A.1.1（b），按照样品分析全部步骤，对浓度值为5μg/L的自配标样进行8次平行测定，详见附表。

6.3 精密度

分别对浓度为0.03μg/L、0.12mg/L、0.18mg/L的自配标样、有证标样203987和实际样品进行测定，每个样品平行测定6～7次，分别计算其测定值的平均值、标准偏差、相对标准偏差。详见附表。

6.4 正确度

分别对浓度为0.03μg/L、0.12mg/L、0.18mg/L的自配标样、有证标样203987、实际样品进行测定，每个样品平行测定6～7次，计算其测定值的平均值、相对误差。对样品（230814HS01、230814FS07

）进行加标，每个加标样品平行测定6次，计算加标样品的实际浓度和加标回收率。详见附表。

7 方法验证结论

7.1 方法线性

标准曲线相关系数r = 0.9996，满足要求；

7.2 方法检出限与测定下限

方法检出限为0.001 mg/L，测定下限为0.004 mg/L。满足要求。

7.3 精密度

分别对浓度为0.03μg/L、0.12mg/L、0.18mg/L的自配标样、有证标样203987和两种类型的实际样品进行测定，相对标准偏差分别为5.0%、2.7%、2.2%、1.3%、3.3%和4.0%，满足要求。

7.4 正确度

分别对浓度为0.03μg/L、0.12mg/L、0.18mg/L的自配标样、有证标样203987进行测定，相对误差分别为1.7%、-0.67%、-0.17%和0.77%，实际样品的加标回收率分别为95.0%、94.0%，，满足要求。

综上，方法各项特性指标全部达到预期要求，本站具备应用《海水 总磷的测定 过硫酸钾氧化法》GB/T12763.4-2007（14）>测定海水中总磷的能力。