摘要：在医药行业中，灭菌是一项非常重要的工作，为达到预期中的灭菌效果，通常会采用高压蒸汽灭菌，这种灭菌方法被称为湿热灭菌。对湿热灭菌装置的灭菌能力进行验证是确保被灭菌物品无菌性的重要前提和基础。纯蒸汽真空脉动灭菌柜作为一款灭菌装置，在正式投入使用前，要对其灭菌工艺进行验证，确保灭菌效果的可靠性。基于此，对纯蒸汽真空脉动灭菌柜的工作原理简要介绍，在此基础上，从热分布验证、热穿透验证和生物指示剂挑战试验三个方面，对纯蒸汽真空脉动灭菌柜湿热灭菌验证展开论述。

关键词：纯蒸汽真空脉动；灭菌柜；湿热灭菌；验证

灭菌是医药行业中的重要工作，常用的方法为湿热灭菌，具体是指借助高压蒸汽使微生物的蛋白质及核酸性质发生改变，从而导致微生物死亡。这种灭菌方法的特点体现在传导快、穿透力强、无残留、无污染、灭菌效果好。在对湿热灭菌的相关装置应用前，要开展灭菌工艺验证。

1纯蒸汽真空脉动灭菌柜的工作原理

纯蒸汽真空脉动灭菌柜（下文简称灭菌装置）常被用于各类医用物品的灭菌，它的基本工作原理如下：用真空泵将灭菌装置内的空气全部抽出，随着空气的不断减少，柜内的压力状态会发生改变，从原本的正压转变为负压，此时再向柜内输入饱和纯蒸汽，在负压状态下，饱和纯蒸汽会以相对较快的速度穿透至物品的内部，这个过程会反复3-4次[1]。微生物蛋白质在高温、高压环境中会快速凝固并失活，由此便可达到灭菌的效果。当灭菌完毕后，再次利用真空泵抽真空，使灭菌装置内的物品快速干燥。该装置最为突出的特点是整个工作流程均由计算机系统控制，基本不会不受人为因素的干扰，灭菌耗时较短、效果好，经过灭菌处理后的物品处于干燥状态。

2纯蒸汽真空脉动灭菌柜湿热灭菌验证

在灭菌装置湿热灭菌验证中，主要的项目有热分布、热穿透、生物指示剂挑战试验等，下面分别对这些验证项目进行分析。

2.1热分布验证

湿热灭菌的热分布验证分为两种情况，一种是空载状态，另一种时负载状态。

2.1.1空载状态

在空载状态下，对灭菌装置热分布情况测定的主要目的如下：检验灭菌介质是否稳定、腔室内的温度分布是否均匀。

（1）测定灭菌装置腔室内不同点的温度，通过各点之间的温度差，判断出腔室内最冷点所在的位置。测定过程中，需要温度探头的数量为10-20个，应当将温度探头均匀布设在腔室内，并在编号后对每个点位处的温度探头牢靠固定，排水口处要放置一个温度探头。测定次数设定为3次，每次所得的结果应当与规定要求相符。

（2）灭菌装置的类型、结构尺寸、设计安装等，会对温度的均匀性造成一定程度的影响，为使影响降至最低程度，应当构建与用户需求完全相符的空载状态温度均匀性。

（3）空载状态下，对灭菌装置温度均匀性进行测试时，应当确保测试结果达到以下要求：3次测试中，每一次测试所得结果显示的温度都要有良好的均匀性，并且最冷点位应当出现在排水口处，如果最冷点位在3次测试中存在变化，但温度的差异并不是很大时，则认为是温度探头存在误差引起的结果不准，此时可将排水口默认为是最冷点位。

2.1.2负载状态

负载状态下，对灭菌装置热分布情况测定的主要目的如下：了解装置处于装载的条件时，内部温度如何分布，具体包括高、低温点所在的位置，给后续验证提供可靠的依据。

（1）负载热分布测试的过程中，温度探头的数量及安放位置与空载状态相同，需要注意的是，必须在空载状态测试中得到的最冷点位处安放温度探头，要将探头安放在灭菌容器的周围，不可以插入容器内。

（2）与空载状态不同，负载热分布测试需要考虑以下几种情况：最大装载量、最小装载量、典型装载量。测试过程中，要选用待灭菌的物品，装载方式与灭菌工艺应当生产时完全相同，尤其各项参数的设定，每种装载量均应开展3次试验。

（3）在负载状态下开展热分布试验时，所得结果的可接受标准与空载状态相同，即确定出最冷点位所处的位置。

2.2热穿透验证

热穿透测试需要在负载状态下开展，测试的物品包括多孔或坚硬物品、液体产品，具体的测试过程如下：

2.2.1多孔或坚硬物品的热穿透测试

（1）此项测试的基础条件为预真空程序121℃、灭菌时间15min，重复测试的次数为3次，所得测试结果应当与规定要求相符。通常情况下，对多孔或坚硬物品进行灭菌时，物品大多数都是混合装载。因此，要对其中最难完成热穿透的物品加以确认。温度探头的数量及位置与负载热分布试验相同，测试正式开始前，要将最难穿透的物品置于最冷点位处，同时将温度探头插入到测试物品的内部。

（2）该试验可接受的标准如下：在灭菌阶段，温度的浮动空间为3℃以内，即最大不得超过124℃；同一个时间段内，所有探头之间的温差不超过2℃；最冷的点位在测试过程中应当具备重现性，即3次试验中该点的位置始终保持不变[2]。

2.2.2液体产品的热穿透测试

（1）液体产品测试的基础条件与多孔或坚硬物品相同，此项测试应当在热分布试验完成后进行，也就是说，要在确定出最冷点位后，才能开展液体产品的热穿透测试。

（2）试验过程中，灭菌装置的装载探头可作为控制探头使用，并插入最冷点位处的液体内部。

（3）负载热穿透试验可接受的标准为最冷点位可以重现；液体产品的效用不会受到试验的影响。

2.3生物指示剂挑战试验

由于热穿透所得的试验数据仅能用于温度的确认，无法根据这个数据确认灭菌装置杀灭微生物的实际能力，所以需要开展生物指示剂挑战试验。通过该试验，能够为灭菌装置对微生物的杀灭效率提供可靠的证据。为简化试验步骤，可将该试验与热穿透测试一并开展。在试验的过程中，要确保所选的生物指示剂具有高于待灭菌物品微生物的耐热性，选好的指示剂可在温度探头测试点的附近，经过灭菌装置灭菌处理后的指示剂通过复活后，应当能够证实灭菌程序可以实现的存活概率。

3结论

综上所述，在对灭菌装置进行应用前，应当开展灭菌工艺试验。通过热分布、热穿透和生物指示剂挑战试验，能够对灭菌装置的灭菌能力进行验证，各项试验结果与可接受标准相符，说明灭菌装置可以达到预期中的灭菌效果。

参考文献：

[1]李影，韩子健.应用无菌保证原理开发湿热灭菌工艺[J].海峡药学.2021，33（8）：6-9.

[2]王舰兵，王云英，李文波，李雨，贺亮.脉动真空湿热灭菌法去除内毒素的验证效果分析[J].中国医药科学.2019，9（19）：138-141.