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摘要：目的：分析对肺结核患者肺泡灌洗液中结核分枝杆菌应用不同检测方式的诊断价值。方法：收集我院2018年5月至2020年1月收治的600例肺结核患者的肺泡灌洗液，将其设置为观察组，另选同期600例非确诊肺结核患者的肺泡灌洗液，并将其设置为参照组。两组患者均采用BALF涂片法、结核菌培养法与PCR法进行检测，对比三种不同检测方法的阳性率。结果：观察组患者的肺泡灌洗液经过三种不同检测方法诊断的阳性率为40%、67.5%、100%，P<0.05;参照组患者的肺泡灌洗液经过三种不同检测方法诊断的阳性率为7.5%、27.5%、40%，P<0.05。结论：PCR法基本能够较准确诊断出人体内的结核分枝杆菌，临床应用价值较高。

目前针对结核分枝杆菌感染的确诊试验大致可分为：BALF涂片法、结核菌培养法与PCR法。BALF涂片法方便快捷且价格便宜，在诊断上具有直接、简便的优点，但不能区分其他抗酸染色阳性的分枝杆菌，且不能确认排出的菌是活菌还是死菌，操作者的辨识能力和经验也会影响涂片的检测结果，且敏感性差也局限了它的诊断范围和实用价值.结核菌培养被认为是结核分枝杆菌检测的“金标准”，其具有准确度高的特点，能够准确诊断出患者体内的结核分枝杆菌，具有较高的诊断价值，将其应用于肺结核患者中可以尽快帮助患者确诊，便于肺结核患者的诊治[1]，但培养时间较长，且需要进一步辨认培养基上菌落的特征。PCR方法是在分子生物学的基础上衍生的一门技术，因其具有菌属特异性并具有扩大效应：当病灶通过血源性外传播时、及在外周血中存在极少量的结核菌时，由于外周血中结核菌的含量甚微，又没有新的病灶形成，因而血清学方法和物理方法均难以达到确诊的目的，PCR法对这类病灶的早期诊断和临床治疗上具有指导意义，因其哪怕只有1个结核分枝杆菌，也能通过扩增实验检测出来;PCR方法时间短：PCR检测结核菌仅需2-4h，对于某些培养法难以实施的病例，PCR法这时候尤其重要;PCR法还可以用来鉴别诊断：对于肺结核来说，其中的结核球和成人型原发性结核等，经常易于同肺癌的诊断相混淆，病灶中心部位经常出现既未见结核分枝杆菌又未见癌细胞的坏死区，此时涂片检测常是阴性的，在这种情况下，PCR检测就显得特别有效.它不但可以扩增能着色的活菌，还可以扩增已死亡的结核分枝杆菌，但DNA尚未降解的死菌，从而确定这样的病灶是恶性还是良性.在许多情况下，结核分枝杆菌可以导致脑膜炎、胸膜炎、腹膜炎等。PCR检测这类标本，可以说极其有效.其极高的特异性和敏感性可以很容易地确定病灶是否有结核分枝杆菌引起的。但是，PCR法在检测结核分枝杆菌时如操作不严格会出现假阳性和假阴性结果，发生假阳性最常见的原因是：样品间的污染和扩增产物的污染.样品间的交叉污染最易发生在样品的处理过程之中.如大家共用一个加样器、剪刀、位置等，因此在处理活检标本时，用剪刀剪碎组织块，每个标本用后，剪刀应在火上烧数分钟，以彻底清除污染在剪刀上的基因片段，对于液态标本的处理，尽可能在同一管子内处理，用具应为一次性的.要解决好扩增物的污染，最佳的方式是减少操作的时间，简化操作手续并使用一次性离心管及接头。因为扩增产物的量一般很高，易于污染实验室任何地方.所以减少打开反应管的次数会降低假阳性的发生率。发生假阴性结果的原因也较多.主要由于各种原因引起的酶活性降低、模板量太少、以及引物作用受到影响等三个方面的因素。本文旨在分析对肺结核患者肺泡灌洗液中结核杆菌应用不同检测方式的诊断价值，报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

收集我院2018年5月至2020年1月收治的600例肺结核患者的肺泡灌洗液，将其设置为观察组，另选同期600例非确诊肺结核患者的肺泡灌洗液，并将其设置为参照组。观察组患者中男性326例，女性274例。年龄范围为36-72（53.27±6.35）周岁。参照组中男性319例，女性281例。年龄范围为37-74（53.29±6.31）周岁。两组受检者统计结果不具备明显差异（P>0.05），可进行对比。

1.2方法

两组受检者均进行BALF涂片法、结核菌培养法以及PCR法检测。样本制备：所有受检者根据病变部位选择灌洗肺段，使用电子支气管镜顶端插入受检者的肺段支气管开口处，而后经活检孔注入2ml的2%利多卡因进行局麻，而后注入5ml～10ml37℃生理盐水，重复灌洗肺部2次或3次，收集15ml肺泡灌洗液。BALF涂片法：标本采集之后立即送检，并采用改良萋尼氏抗酸染色，通过显微镜对标本进行观察，如果在100个视野当中存在3个～9个及以上的结核杆菌即为阳性。结核菌培养法：直接应用患者的肺泡灌洗液进行结核菌培养，将患者的肺泡灌洗液采用容器密封，避免倒置，以防肺泡灌洗液外溢，将肺泡灌洗液置于4摄氏度的冰箱内保存，避免肺泡灌洗液干涸或被污染;将培养基取出，放置到室温后做好相应的培养序号，将患者的姓名、培养日期等信息写上;利用碱处理法对肺泡灌洗液进行处理，处理后在室温条件下放置10min～15min，不能超过20min，取前处理消化后痰液0.1ml，严格采取无菌操作将其接种于培养基的斜面上，每一份标本需要同时接种2支酸性改良罗氏培养基，并放置在37摄氏度的温度下进行孵育;接种后3～7天，开始观察菌落生长情况，一般需要持续观察2周到6周，才能确认是否有菌落生长。PCR法：直接应用患者的肺泡灌洗液进行实验室检测，将患者的肺泡灌洗液采用容器密封，避免倒置，以防肺泡灌洗液外溢，将肺泡灌洗液置于2摄氏度到8摄氏度的冰箱内保存，避免肺泡灌洗液干涸或被污染;利用碱处理法对肺泡灌洗液进行液化处理，漩涡震荡混匀15s，室温下放置15min使其充分液化，吸取1ml加入带旋盖的离心管中。每分钟10000转离心5min后弃去上清，加入1ml生理盐水后混匀，重复每分钟10000转离心5min后弃去上清，加入100ul的DNA提取液，漩涡混匀15s后100摄氏度恒温处理10min。每分钟10000转离心2min后将上清转移至新的离心管中备用。同种方法处理阳性对照。将试剂在EP管中混匀，分装至PCR管中后向每管加入密封液。盖好管盖后离心，立即进行扩增试验，然后根据阴性对照和阳性对照判读结果。

1.3研究指标

对比三种不同检测方法的阳性率。

2统计学方法

计量数据与计数数据分别采用平均值±标准差（±S）、百分比（%）表示，并分别应用t、x²检验。输入统计学软件SPSS22.0中分析，结果P<0.05说明差异有统计学意义。

3结果

观察组经过BALF涂片法的阳性例数有240例，占比40%;经过结核菌培养法的阳性例数为405例，占比67.5%，差异显著（X²=91.2634;P=0.0000）;经过PCR法的阳性例数为600例，占比100%，与结核菌培养法差异显著（X²=232.8358;P=0.0000）。参照组经过BALF涂片法的阳性例数有45例，占比7.5%;经过结核菌培养法阳性例数为165例，占比27.5%，经过PCR法的阳性例数均为240例，占比40%，差异显著（X²=20.9644;P=0.0000）。

4讨论

肺结核是由于感染结核分枝杆菌引起的一种呼吸道传染性疾病，近年来肺结核的发病率呈现出逐年上升的趋势，成为危害人们身体健康的一个公共问题[2]。肺结核患者的传统诊断方法为涂片抗酸染色法，但该方法的缺点是特异性差、敏感度低，优点在于可对肺结核患者开展早期诊断。结核菌培养法作为结核病诊断的“金标准”，其准确度较高，应用于肺结核患者中能有效检出其阳性反应，但其缺点在于所需时间较长。PCR是近年来新兴方法，比起传统诊断方法其优点在于具有更高的敏感度与特异性，能够快速、准确的诊断出肺结核患者，但偶尔会出现假阳性这一缺陷[3]。在肺结核患者的临床应用中，可根据患者的实际情况适当选择相应的检测方法，提升患者的阳性检出率，也便于医师根据患者的情况制定治疗方案，提升患者的有效性。本次研究结果显示：观察组患者的肺泡灌洗液经过三种不同检测方法诊断的阳性率为40%、67.5%、100%，P<0.05;参照组患者的肺泡灌洗液经过三种不同检测方法诊断的阳性率为7.5%、27.5%、40%，P<0.05。

综上所述，PCR法能够较准确诊断出人体内的结核杆菌，临床应用价值较高，值得推广。

参考文献：

[1]唐婧，王庆，徐东芳，等.肺泡灌洗液不同检测方法在肺结核诊断中的临床价值[J].临床肺科杂志，2019，24（01）：133-134+182.

[2]蒋莎莉，梁伟军，朱德茂，等.不同检测方法对肺结核患者肺泡灌洗液中结核杆菌的诊断价值[J].中南大学学报（医学版），2017，42（06）：647-651.

[3]蒋莎莉，朱德茂，罗海军，等.肺结核患者肺泡灌洗液中结核杆菌检测的方法学评价[J].广东医学，2017，38（01）：102-104.