摘要：目的：综合分析新型冠状病毒实验室核酸检测方法，研究采取荧光定量PCR方式在实验室检测中的实践应用与临床价值。方法：研究对象从2022年10月11日-2022年11月15日范围内进行选择，选取出此时间段内送往我单位的单采样本共6092例，均采用荧光定量PCR方法进行检测，主要检测新型冠状病毒核壳蛋白（N）基因与开放读码框lab（ORFlab），并统计出检测后的阳性病例数。结果：6092份单采样本在经过实验室核酸检测后发现，检测结果呈现出阳性的结果共有85份，表明检测阳性率为1.4%。结论：新型冠状病毒疫情的暴发严重危急社会民众的生命健康，对此期间内的高危人群实施新型冠状病毒实验室核酸检测至关重要，荧光定量PCR是科学有效的检测方式，兼具准确性与快速性，能够在确保患者第一时间得到救治的同时控制疫情的蔓延，对于监测疫情具有积极的意义。

关键词：新型冠状病毒；实验室；核酸检测；荧光定量PCR

新型冠状病毒的暴发引起了全球的关注和恐慌，这是一种呼吸系统疾病，主要表现为肺炎特征，目前被命名为“SARS-CoV-2”[1]。新型冠状病毒最初在湖北武汉市首发，其具有严重的危害性，短短几日便已蔓延至全国，由于感染者早期症状兵不明显，人群普遍易感，可以通过飞沫和接触进行传播，为了进一步防控疫情，核酸检测逐渐成为临床重要的检测方式。核酸检测可以说是新型冠状病毒诊断的“金标准”，兼具高准确性与高灵敏度，荧光定量PCR是目前用于诊断是否确诊的重要方法，在疫情防控中进行有效应用能够对疑似和确诊病例做出准确的诊断，并不断在实践中积累丰富的经验，从而为社会民众的生命健康提供可靠保障[2]。基于此，本次研究重点分析新型冠状病毒实验室核酸检测方法，深入分析荧光定量PCR的实践检测效果，以提供有益的经验和参考，具体报道为以下内容。

1.1 一般资料

1.1.1样本来源

将2022年10月11日-2022年11月15日作为时间范围，从中选出6092例单采样本纳入此次研究，所有标本均来自于各隔离点送检样本，储存和运输均严格按照标准执行。

1.1.2检测仪器与试剂

本次研究中采用的试剂包含核酸提取试剂盒（上海之江）、新型冠状病毒核酸检测试剂盒（思路迪、中元、之江），检测仪器包含核酸提取仪（上海之江），产物扩增仪器（西安天隆）。

1.2方法

1.2.1核酸提取与产物扩增

核酸提取使用磁珠法，准备好核酸提取试剂盒，其中包含有磁珠结合液与洗涤液、蛋白酶K与洗脱液。参考中国疾病预防控制中心病毒预防控制所制定的新型冠状病毒核酸引物与探针序列，选择新型冠状病毒核壳蛋白基因区域的引物和探针及开放读码框[3]。

1.2.2解读检测结果

在进行标本采集、核酸提取与产物扩增等期间，为最大限度避免出现假阴性结果，需采用含内源性检测系统的试剂实施监控，同时在检测样本时按要求做好阳性与阴性质控品的检测。实验室检测完毕后，在分析检测结果时，首先对阳性与阴性质控品结果进行观察与分析，其中标准为：阳性质控品N基因与ORFlab基因应ct值均不低于32且存在明显的扩增曲线，而阴性质控品N基因与ORFlab基因应均未有明显的扩增曲线，但IC需存在明显的扩增曲线。在整个研究过程中，需确保阳性和阴性质控品均满足以上要求，满足方代表实验有效，否则需重新开展检测工作。

针对单个样本检测结果，其ct参考着需根据试剂盒的要求进行，通常情况下，单个样本结果分析需按照以下模式：①若检测发现IC曲线呈现出S型扩增，N基因与ORFlab基因也扩增阳性且ct值不低于40时，提示样本新型冠状病毒核酸为阳性。②若检测发现IC曲线呈现出S型扩增，N基因与ORFlab基因却无明显扩增且ct值低于40时，提示样本新型冠状病毒核酸为阴性。③若检测发现IC曲线呈现出S型扩增，N基因或ORFlab基因出现单通道阳性扩增且ct值不低于40时，能够判断为阳性，报告为N但基因或ORFlab阳性；若二次复核结果为双基因均为阴性，则提示样本新型冠状病毒核酸为阴性。④若检测发现IC曲线并未呈现出S型扩增，则表明核酸提取失败，应重新进行检测，若重测仍然未呈现出S型扩增，则表明需再次重新进行标本采集与检测。

1.2.3生物安全管理

新型冠状病毒已被纳入传染病乙类管理，为避免检测结果出现偏差，在实验室核酸检测时必须严格采取相应的预防及控制对策，实验室内应包含基本防护用品，比如医用防护帽、护目镜、N95口罩以及防护服等，按照检测流程规范进行检测，并对实验室做好分区设置。实验室内产生的垃圾均被为带有传染性的医疗垃圾，需进行统一收集，装在医用垃圾袋内进行封口后才可带出，并需做好消毒灭菌处理[4]。

1.3 观察指标

根据实验室检测结果统计出新型冠状病毒核酸检测为阳性的病例数，并计算出阳性率。

1.4统计学方法

将实验研究所得数据经由专业的数据分析软件SPSS23.0进行处理，采用（）表示计量资料，通过t进行检验，使用x2检验技术资料，P＜0.05表示具有统计学意义。

2.结果

2.1新型冠状病毒核酸检测结果分析

通过综合研究分析发现，在接受检测的6092份单采样本中，新型冠状病毒核酸检测结果呈现为阳性的共有85份，其阳性率为1.4%，其余6007例为阴性；且阳性患者的年龄分布区间为18岁-75岁，男性阳性结果一共64份，占比75.29%；女性阳性结果一共21份，占比24.71%。

3.讨论

新型冠状病毒（SARS-CoV-2）是近几年全球范围内最严重的传染病疫情，自2020年初开始，新冠病毒已经迅速在全球范围内传播。新型冠状病毒具有高传染性，病死率极高，不仅导致全球公共卫生遭受到严重冲击，而且还对经济社会发展造成影响。控制新型冠状病毒传播的关键在于及时且准确地开展检测，随着病毒变异的不断增加，传统的病毒检测方法已经无法满足对于疫情的检测和控制需求，且常规的症状检查、CT影像等难以有效明确是否感染，而核酸检测作为最重要的检测方法，在病毒传播高峰期对于控制疫情蔓延具有积极的作用。

荧光定量PCR方法应用十分广泛，其优点在于灵敏度高、特异性强、操作简便，在实验室检测过程中，标本采集是至关重要的环节，标本的正确采集与保存是保证检测结果准确度的关键，一般临床包含有咽拭子、口腔拭子、鼻咽拭子等，此次研究主要选择鼻咽拭子和咽拭子，在采集样本前需要进行充分的准备工作，于患者的扁桃体和悬雍垂两侧进行反复刮取并放置于病毒保存液内，并确保样本采集在无菌条件下进行[5]。与此同时，样本处理也是影响新型冠状病毒核酸检测最终结果的关键因素，需严格按照规定进行运送和处理，确保操作的规范性，其中处理流程包括核酸提取、PCR扩增及检测结果解读等。荧光定量PCR是检测新型冠状病毒的有效方式，其一般是通过提取患者样本中的RNA进行PCR扩增，只有存在RNA时，才会扩增出目标序列[6]。新型冠状病毒核酸检测结果需要在专业实验室中进行解读和报告，解读结果需要根据扩增曲线、Ct值等指标进行，且对于检测结果的报告需做好充分的解释和说明；但需要明确的是，新型冠状病毒实验室核酸检测仅仅能够检测受检者是否感染，无法对病毒的活性及感染性做出判断。针对检测结果呈现出阳性的样本，可以通过复检的方式进行确认，以确保结果的准确性；一旦检测结果显示IC曲线无S型扩增则表明核酸提取步骤出现问题若二次进行后仍未有变化则必须重新进行标本的采集与后续的检测操作[7]。需注意，在报告检测结果时应注重保护受检者的个人隐私和信息安全，除了做好实验室的数据处理以外，应严格遵守相关的法律法规，避免受检者的信息出现泄露。

参考《传染病防治法》可知，新型冠状病毒已经被国家卫生健康委纳入乙类传染病，针对密切接触者需依法严格进行隔离治疗、隔离观察等相关防控对策，以最大限度控制疫情的传播和蔓延[8]。鉴于新型冠状病毒的高风险性与高传播性，实验室核酸检测必须加强生物安全管理，在检测过程中需要建立严格的质控体系，包括对实验室环境、设备、试剂以及数据分析等方面的监管和验证。检测过程中，每组分为三人，按要求合理穿戴好各项防护用品，彼此之间进行检查，以免出现防护不当的现象，提高防护有效率；在手工操作样本时必须规范操作行为，在生物安全柜内实施，垃圾桶内套上医疗垃圾袋，倒入适量的消毒液；针对加样的枪头需及时进行丢弃，且每次检测后必须将垃圾袋进行密封，值得注意的是，实验室内产生的垃圾均为传染性医疗垃圾，密封后还需做好高压灭菌消毒处理，从源头上控制好感染。与此同时，新型冠状病毒实验室人员应具备全面的专业知识和技能，对核酸检测的原理有充分的了解，明确核酸检测的基础理论，熟悉相应的操作规程，定期开展专门的培训与考核，积极强化安全意识和防范措施；且针对实验室环境、检测样本、试剂和实验设备等应加强管理与监督，构建完善的生物安全管理制度，最大限度避免出现感染现象。

近年来，虽然新型冠状病毒感染例数逐渐出现下降，但在实践中却发现部分患者出现多次连续核酸检测阴性后转为阳性的情况，导致防疫工作面临新的挑战。通过深入研究发现，采集标本、患病病程、实验操作及试剂来源等都会对最终的检测结果造成干扰和影响，因此在获得检测结果时，需结合受检者的具体情况来判断检测价值。在临床防疫工作中，针对任何可疑的结果都不应当忽视，必须对其严格按照要求采取相应的隔离和监管措施，避免因一时的疏漏引发严重的后果。目前有相关研究报道显示，除了核酸检测外，肺部CT对于一些核酸阴性患者的诊断也具有一定的价值[9]。针对存在十分典型的临床症状与表现或是存在密切接触史的患者，即使其新型冠状病毒核酸检测结果呈现为阴性，仍需按照相关管理条例实施隔离观察，以防造成病毒的大范围传染。

通过此次对6092例单采样本进行实验室荧光定量PCR检测发现，检测结果呈现为阳性的共有85份样本，阳性率为1.4%。回顾可知，本次研究采用鼻咽拭子和咽拭子作为标本，虽然有研究表明痰标本更具高敏感性，但实践发现痰标本的检测步骤相对较为复杂，需要经过液化处理，易导致检测结果的偏差，增加假阴性风险[10]。因此，在新型冠状病毒核酸检测中，标本类型的选择是检测期间需重点关注的因素，应当根据具体情况选择适宜的标本类型，这对于后续评估感染患者治愈具有重要的意义。除此以外，新型冠状病毒核酸检测试剂的选择同样不可忽视，当前已有多家核酸检测试剂生产，考虑到当时疫情的紧急，核酸检测试剂的使用并未获得临床应用数据的有效支撑。因此，为确保检测结果的准确性，在试剂选择时应优先选用有注册证的产品，在初次使用时做好综合考评工作；同时针对标本采集、保存、转运、核酸提取、扩增和检测等环节执行相应的质量控制措施，以保障检测结果的科学性与可靠性。总而言之，发展新型冠状病毒实验室核酸检测方法具有重要的意义，一方面可以提高检测的灵敏度和准确性，有助于在早期判断和隔离感染病例时预先发现潜在的感染者，更好地控制疫情的传播；另一方面，新型核酸检测方法的开发和应用还可以促进病毒学、分子生物学以及生物信息学等领域的研究发展，为未来病毒检测技术的进步提供宝贵的经验和启示。

综上所述，新型冠状病毒的近年来全球最严重的公共卫生事件，疫情初期的治疗的确诊十分困难，实验室核酸检测方法的应用可以帮助更加快速且准确地识别出确诊病例，以便采取有效的防控手段来抵御病毒的侵袭。

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